疾病模型＆免疫缺陷鼠
NOD—SCID小鼠
通過基因編輯技術(shù)，在非肥胖性糖尿病小鼠（NOD）品系上引入 Prkdc（Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide，又名 scid）基因突變，從而建立的新型免疫缺陷小鼠。
特征
1.NOD-SCID 小鼠既擁有 C.B-17 SCID 小鼠的特征，缺乏適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，不再發(fā)生自發(fā)免疫性糖尿病，同 時還表現(xiàn)出 NOD 小鼠所具有的多種固有免疫缺陷，包括NK細胞活性低、沒有溶血補體活性，骨髓發(fā)育缺陷，是一種更易于異種移植成功并可穩(wěn)定應(yīng)用的動物模型。
2.NOD-SCID 小鼠的壽命一般為8-9個月，因此不適用于長期移植實驗。
用途
1.同種和異種腫瘤移植：血清免疫球蛋白 Ig 泄漏率低于 SCID小鼠，腫瘤成活率高。
2.血液學實驗研究：建立人類白血病模型、干細胞移植、藥物研究等研究。
3.免疫學及炎癥研究。
4.糖尿病和肥胖研究： I型糖尿病。
成長曲線
生理生化數(shù)據(jù)
NOD-SCID小鼠淋巴細胞和NK細胞驗證：
基因鑒定報告：
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樣本信息和目的：
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樣本：NOD-SCID小鼠
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目的：確認NOD-SCID小鼠基因修飾類型
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靶基因：Prkdc Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide
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NCBI號：19090
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NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/19090
方法和結(jié)果
PRKDC（Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide，DNA 依賴性蛋白激酶，又名 scid）能識別和傳遞 DNA 斷裂損傷信號，當細胞 DNA 發(fā)生斷裂損傷后，PRKDC 復(fù)合物就聚合在損傷位點上，隨之蛋白激酶被活化，募集并磷酸化其下游的 DNA 修復(fù)蛋白啟動 DNA 斷裂修復(fù)。此外，PRKDC 在維持端粒穩(wěn)定性，免疫蛋白質(zhì)的位置特異性重組中也發(fā)揮重要的作用。Prkdc 基因位于小鼠 16 號染色體上，有 87 個外顯子。
查詢 Prkdc 基因的轉(zhuǎn)錄本信息進行各外顯子序列的檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn) Prkdc 基因有多個轉(zhuǎn)錄本，選擇轉(zhuǎn)錄本 Prkdc-201 ENSMUST00000023352.8（如圖 2）為模板進行引物設(shè)計、和測序比對： http://asia.ensembl.org/Mus_musculus/Tran/Sequence_cDNA?db=core;g=ENSMUSG00000022672; r=16:15637889-15842235; t=ENSMUST00000023352以 Prkdc 基因DNA為模板，設(shè)計 86 個外顯子的擴增測序引 物，并把 PCR 產(chǎn)物進行 Sanger 測序，并于報告模板進行比對，結(jié)果顯示 Prkdc 基因 85 號外顯子顯示出一個堿基的改變，其他有少量由于產(chǎn)物兩端測序質(zhì)量不好導(dǎo)致的序列不擬合被忽略掉。
Prkdc 基因 85 號外顯子發(fā)生單核苷酸改變（T 突變?yōu)?nbsp;A）后，提前引入終止密碼子，導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止。堿基突變后 PRKDC 蛋白預(yù)測將截短 83個氨基酸。
結(jié)論
斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司 NOD-SCID 小鼠的基因編輯類型為：Prkdc 基因 85 號外顯子單堿基發(fā)生突變，提前引入終止密碼子，導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止。
